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体外培育牛黄

Tiwɑi Peiyu Niuhuɑng

BOVIS CALCULUS SATIVUS

本品以牛科动物牛Bos taurus domesticus Gmelin的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成。

【性状】 本品呈球形或类球形，直径0.5～3cm。表面光滑，呈黄红色至棕黄色。体轻，质松脆，断面有同心层纹。气香，味苦而后甘，有清凉感，嚼之易碎，不粘牙。

【鉴别】 （1）取本品粉末少量，用清水调和，涂于指甲上，能将指甲染成黄色。

（2）取本品粉末少许，用水合氯醛试液装片，不加热，置显微镜下观察：不规则团块由多数黄棕色或棕红色小颗粒集成，稍放置，色素迅速溶解，并显鲜明金黄色，久置后变绿色。

（3）取本品粉末少量，加三氯甲烷1ml，摇匀，再加硫酸与浓过氧化氢溶液（30%）各2滴，振摇，溶液即显绿色。

（4）取本品粉末0.1g，加盐酸1ml和三氯甲烷10ml，充分振摇，混匀，三氯甲烷液呈黄褐色，分取三氯甲烷液，加氢氧化钡试液5ml，振摇，即生成黄褐色沉淀。分离除去水层和沉淀，取三氯甲烷液约1ml，加醋酐1ml与硫酸2滴，摇匀，放置，溶液呈绿色。

（5）取本品粉末10mg，加三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品、去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15:7:5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】 水分 不得过9.0%（通则0832第二法）。

游离胆红素 取本品细粉10mg，精密称定，置5ml量瓶中，加三氯甲烷4ml，微温，放冷，加三氯甲烷至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在453nm波长处测定吸光度。吸光度不得过0.70。

【含量测定】 胆酸 取本品细粉0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加20%氢氧化钠溶液10ml，加热回流2小时，冷却，加稀盐酸19ml调节pH值至酸性，用乙酸乙酯提取4次（25ml、25ml、20ml、20ml），乙酸乙酯液均用同一铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过，滤液合并，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.48mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，精密吸取供试品溶液2μl、对照品溶液1μl与3μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸丁酯-冰醋酸-甲酸（8:4:2:1）为展开剂，展距14～17cm，取出，晾干，喷以30%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法（通则0502薄层色谱扫描法）进行扫描，波长：λS＝380nm，λR＝650nm，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。

本品按干燥品计算，含胆酸（C₂₄H₄₀O₅）不得少于6.0%。

胆红素 对照品溶液的制备 取胆红素对照品10mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含胆红素10μg）。

标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置具塞试管中，加乙醇至9ml，各精密加入重氮化溶液（甲液：取对氨基苯磺酸0.1g，加盐酸1.5ml与水适量使成100ml。乙液：取亚硝酸钠0.5g，用水溶解并稀释至100ml，置冰箱内保存。临用时取甲液10ml与乙液0.3ml，混匀）1ml，摇匀，在15～20℃的暗处放置1小时，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在533nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法 取本品细粉约10mg，精密称定，置锥形瓶中，加三氯甲烷-乙醇（7:3）的混合溶液60ml、盐酸1滴，摇匀，置水浴上加热回流30分钟，放冷，转移至100ml棕色量瓶中，容器用少量上述混合溶液洗涤，洗液并入同一量瓶中，加上述混合溶液至刻度，摇匀。精密量取上清液10ml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取3ml，置具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自"加乙醇至9ml"起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含胆红素的重量（mg），计算，即得。

本品按干燥品计算，含胆红素（C₃₃H₃₆N₄O₆）不得少于35.0%。

【性味与归经】 甘，凉。归心、肝经。

【功能与主治】 清心，豁痰，开窍，凉肝，息风，解毒。用于热病神昏，中风痰迷，惊痫抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疔疮。

【用法与用量】 0.15～0.35g，多入丸散用。外用适量，研末敷患处。

【注意】 孕妇慎用；偶有轻度消化道不适。

【贮藏】 密闭，遮光，防潮，防压，室温保存。

附：1. 去氧胆酸质量标准

去氧胆酸

本品由牛胆汁经提取、加工制成。

〔性状〕 本品为白色的结晶性粉末。气微，味微苦。

本品易溶于冰醋酸和乙醇，不溶于水。

〔鉴别〕 取本品10mg，加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15:7:5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

〔检查〕 干燥失重 取本品，在105℃干燥4小时，减失重量不得过0.5%（通则0831）。

炽灼残渣 不得过0.2%（通则0841）。

〔含量测定〕 取本品约0.5g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）60ml，置水浴中加热使溶解，冷却，加酚酞指示液数滴及新沸过的冷水20ml，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，近终点时加新沸过的冷水100ml，继续滴定至终点。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于39.26mg的去氧胆酸（C₂₄H₄₀O₄）。

本品按干燥品计算，含去氧胆酸（C₂₄H₄₀O₄）不得少于95.0%。

〔用途〕 体外培育牛黄的原料。

〔贮藏〕 密封。

2. 胆酸质量标准

胆酸

本品由牛、羊胆汁或胆膏经提取、加工制成。

〔性状〕 本品为白色的结晶性粉末。气微，味苦。

〔鉴别〕 取本品10mg，加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15:7:5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

〔检查〕 干燥失重 取本品，在105℃干燥4小时，减失重量不得过0.5%（通则0831）。

炽灼残渣 不得过0.2%（通则0841）。

〔含量测定〕 取本品约0.4g，精密称定，置250ml锥形瓶中，加水20ml和乙醇40ml，用表面皿覆盖，置水浴中缓缓加热使完全溶解，冷却，加酚酞指示液5滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于40.86mg的胆酸（C₂₄H₄₀O₅）。

本品按干燥品计算，含胆酸（C₂₄H₄₀O₅）不得少于95.0%。

〔用途〕 体外培育牛黄的原料。

〔贮藏〕 密封。

3. 复合胆红素钙质量标准

复合胆红素钙

本品由牛胆汁、胆红素和饱和氢氧化钙溶液经加工制成。

〔性状〕 本品为棕红色或棕黄色的粉末。味微腥。

〔鉴别〕 取本品粉末5mg，加三氯甲烷15ml，加盐酸溶液（5→10）0.1ml，超声处理30分钟，加三氯甲烷35ml，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取胆红素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10:1:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

〔检查〕 水分 不得过5.0%（通则0832第二法）。

〔含量测定〕 对照品溶液的制备 取胆红素对照品10mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含胆红素10μg）。

标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置具塞试管中，加乙醇至9ml，各精密加入重氮化溶液（甲液：取对氨基苯磺酸0.1g，加盐酸1.5ml与水适量使成100ml。乙液：取亚硝酸钠0.5g，用水溶解并稀释至100ml，置冰箱内保存。临用时，取甲液10ml与乙液0.3ml，混匀）1ml，摇匀，在15～20℃的暗处放置1小时，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在533nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法 取本品细粉，约10mg，精密称定，置锥形瓶中，加三氯甲烷-乙醇（7:3）的混合溶液60ml、盐酸1滴，摇匀，置水浴上加热回流30分钟，放冷，转移至100ml棕色量瓶中，容器用少量上述混合溶液洗涤，洗液并入同一量瓶中，加上述混合溶液至刻度，摇匀。精密量取上清液10ml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取3ml，置具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自"加乙醇至9ml"起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含胆红素的重量（mg），计算，即得。

本品按干燥品计算，含胆红素（C₃₃H₃₆N₄O₆）不得少于43.0%。

〔用途〕 体外培育牛黄的原料。

〔贮藏〕 密封。

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